【作者】范艷華 張永軍 羅志兵 馮靜 方衛(wèi)國 裴炎

【機構】農(nóng)業(yè)部生物技術與作物品質(zhì)改良重點實驗室 重慶市農(nóng)業(yè)生物技術重點實驗室 西南大學生物技術中心農(nóng)業(yè)部生物技術與作物品質(zhì)改良重點實驗室 重慶市農(nóng)業(yè)生物技術重點實驗室 西南大學生物技術中心 重慶400716

【摘要】我們從球孢白僵菌中克隆了絲氨酸蛋白酶Pr1類基因CDEP-1。為明確CDEP-1的功能、評價其在害蟲生物防治中的潛力,需要大量制備具有生物活性的CDEP-1編碼蛋白。由于大腸桿菌系統(tǒng)表達真核基因存在產(chǎn)物復性困難的問題,本文利用畢赤酵母系統(tǒng)來表達CDEP-1。結果表明,CDEP-1可在畢赤酵母中高效的分泌表達,而且產(chǎn)物活性高,甲醇誘導48h后上清液中的酶活即可達到38,266U/L。誘導表達的上清液經(jīng)濃縮后進行凝膠過濾層析,得到了CDEP-1的初純品,蛋白質(zhì)含量為50mg/L。將純化的蛋白酶CDEP-1免疫家兔,制備了CDEP-1的抗血清。Westernblotting分析表明,制備的抗血清可特異性地檢測CDEP-1。 

【基金】國家重點基礎研究發(fā)展計劃(973)項目(2003CB114203)； 國家高技術研究發(fā)展計劃(863)項目(2002AA245021)；

【關鍵詞】毒力因子; 凝膠過濾層析; 抗血清;